高通量药敏检测指导儿童急性白血病个体化治疗的初步探索——摘要、资料与方法
摘要
目的
探究高通量药敏（high-throughput drug sensitivity,HDS）检测技术在儿童复发难治性急性白血?。╮elapsed and refractory acute 1eukermia,RR-AL）的应用现状及分析挽救治疗方案的可行性。
方法
回顾性收集2021年11月—2023年10月郑州大学第一附属医院儿童血液与肿瘤科行HDS检测的RR-AL患儿的临床资料，并对药敏结果及治疗结局进行分析。
结果
17例RR-AL患儿接受HDS检测，复发难治性急性髓系白血病7例（41%），复发难治性急性淋巴细胞白血病10例（59%）。高度敏感化疗药物/方案的检出率为53%（9/17），中度敏感化疗药物/方案的检出率为100%（17/17）。17例RR-AL患儿高度敏感度和中度敏感度化疗药物及方案中，MOACD方案（米托蒽醌+长春新碱+阿糖胞苷+环磷酰胺+地塞米松）占比100%，单药米托蒽醌抑制率最高（94%，16/17），靶向药抑制率最高为硼替佐米（94%，16/17）。9例患儿根据HDS结果调整化疗，行造血干细胞移植4例；无病生存4例，死亡5例。8例经验化疗，行造血干细胞移植2例；无病生存4例，死亡4例。
结论
HDS检测技术可为儿童RR-AL筛选出高度敏感药物/方案，提高再次缓解率，为后续进行造血干细胞移植创造条件。
引言
复发难治性急性白血病（relapsed and refractory acute 1eukermia,RR-AL）是严重危及儿童生命的血液系统恶性肿瘤，长期生存率仅30%左右，已成为儿童急性白血病死亡的主要原因之一。指南多推荐加入临床试验或采用新型的组合方案进行挽救性化疗，然而盲目试药效果往往欠佳，最终导致不良预后。如何制定RR-AL个性化用药方案来提高治疗缓解率是临床热点探讨并亟待解决的难题。高通量药敏（high-throughput drug sensitivity,HDS）检测技术是一种新兴的可再生原代癌细胞药敏检测技术，一次可检测上百种药物，实现高通量检测化疗药、靶向药、化疗联合方案的药敏，为精准治疗提供了一个有力的工具。HDS检测技术已被报道成功应用于卵巢癌、骨髓增生异常综合征、晚期肺癌、成人RR-AL患者的治疗中，儿童患者相关研究报道少见。本研究回顾性分析我中心17例进行HDS检测的儿童RR-AL的临床资料，探讨HDS在儿童RR-AL中的应用价值。
1资料与方法
1.1研究对象
回顾性收集2021年11月—2023年10月于郑州大学第一附属医院儿童血液与肿瘤科行HDS检测的17例RR-AL患儿的临床资料、HDS结果及治疗结局。RR-AL定义为：（1）用标准诱导缓解方案治疗2个疗程未达部分缓解者；（2）首次缓解后6个月内复发者（又称“早期复发”）；（3）首次缓解6个月后复发，但用原诱导缓解方案再次治疗失败者；（4）多次复发者。复发定义为：骨髓中白血病细胞超过5%（又称“髓内复发”）；或出现骨髓以外部分的白血病病变（又称“髓外复发”）。该研究已通过郑州大学第一附属医院伦理委员会批准并免除知情同意（2024-KY-0313-002）。
1.2 HDS检测方法
收集患儿骨髓液4 mL或外周血8 mL，保证无溶血、凝血、污染，48 h内送检，肿瘤细胞比例>70%。样本送中科普瑞昇医学检验实验室有限公司进行HDS检测。分离单核细胞，加完全培养液培养24 h。待测药物包括急性髓系白血?。╝cute myeloid leukemia,AML）和急性淋巴细胞白血?。╝cute lymphocyte leukemia,ALL）的一线及二线化疗用药、部分实体瘤化疗药物、靶向用药的单药及组合方案，共有4种方案（88、119、120、121种药物/方案）。将待测药物溶于二甲基亚砜（dimethyl sulfoxide,DMSO）中，按照临床剂量对应的100％血浆峰浓度配置药物，储存于384孔透明药板，采用同等体积的DMSO溶剂作为对照。在96孔板中按每孔10万个细胞/mL浓度接种细胞50μL，培养72 h后，每孔中加入20μL的CellCounting-Lite2.0工作液，诱导细胞裂解，静置10 min，多功能酶标仪（Perkin Elmer-EnVision 2015）读数，得出对应的每孔相对荧光值（relative light unit,RLU）。待测化合物的RLU药物与DMSO对照组RLUDMSO进行预处理，计算待测药物对癌细胞的生长抑制率，抑制率（％）=（1-药物筛选组肿瘤细胞存活数目/空白对照组肿瘤细胞存活数目）×100％。
1.3 HDS检测结果的应用
筛选方案的实施过程：（1）参考HDS检测报告及相关文献［6］，药物高度、中度、低度敏感及不敏感分别定义为抑制率≥80％、≥50％且<80％、≥20％且<50％、<20％；（2）参考NCCN指南、《临床肿瘤内科手册》、国内专家共识确定药物使用剂量、方法、顺序和频次；（3）临床医生综合考虑患儿用药禁忌、身体耐受能力、用药史、经济承受能力等，监测不良反应，并及时对症处理；（4）应用筛选方案，最多不超过3个疗程?；竦靡欢菩Ш?，若有合适的供者，及时行造血干细胞移（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）。
1.4疗效评价
粒细胞缺乏期结束后评估疗效，骨髓涂片原始和幼稚细胞比例小于5％，判定为骨髓形态学缓解；流式细胞仪检测白血病细胞比值，低于0.01％，判定为微小残留病（minimal residual disease,MRD）转阴。末次随访时间为2023年12月31日。
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