清开灵注射液对金葡菌生长代谢的抑制作用（二）
2重现性考察
采用微量量热之停流法测定金葡菌生长热谱曲线,在相同的实验条件下重复测定3次,P1、P2、k1、ΔT的RSD值分别为3.468%、4.474%、2.416%和0.941%，说明实验结果具有良好的重现性。
3清开灵注射液不同剂量对金葡菌代谢的影响
采用同一来源与批号的样品(SXTH,071120),分别设置了0~6.67%(0~200μL)的8个浓度梯度进行考察。由图2可见，在清开灵浓度范围0.83%~5.00%时，清开灵的量与抗金葡菌作用具有良好的线性关系;当清开灵在体系中浓度增加至6.67%时，金葡菌生长曲线已严重变形，不再适用于指数生长模型，见图2曲线h。
4清开灵注射液对金葡菌生长代谢的抑制作用
药物对细菌的抑制率I=(k0-kv)/k0x100%,式中k0为未加药物时细菌生长代谢的速率常数,kV为细菌受到剂量为V的药物抑制时的速率常数。由此计算出金葡菌在清开灵注射液不同浓度下的抑制率I,作V-I(%)图,求得半数抑菌浓度为3.26%。当k1为0时,细菌完全停止生长，求得最佳抑菌量为5.47%。细菌传代时间tG=ln(2)/k。详细参数见表1。
Table 1 清开灵注射液不同剂量对金葡菌生长代谢参数的影响| C(%) | 指数生长期 | k1/min?1 | 稳定期 | Qt/mJ | ΔT/min | tG/min | I | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| T1/min | P1/μW | Q1/mJ | T2/min | P2/μW | Q2/mJ | ||||||
| 0 | 196 | 30.661 | 63.995 | 0.03426 | 444 | 32.468 | 242.125 | 378.011 | 248 | 20.232 | - |
| 0.83 | 204 | 28.305 | 68.863 | 0.02753 | 462 | 30.191 | 278.888 | 402.654 | 258 | 25.178 | 0.196 |
| 1.67 | 206 | 22.403 | 54.885 | 0.02451 | 486 | 26.437 | 268.776 | 359.542 | 280 | 28.280 | 0.285 |
| 2.50 | 210 | 17.789 | 52.341 | 0.02055 | 542 | 22.592 | 285.151 | 374.263 | 332 | 33.730 | 0.400 |
| 3.33 | 212 | 13.664 | 47.857 | 0.01702 | 598 | 19.904 | 299.357 | 388.404 | 386 | 40.725 | 0.503 |
| 4.17 | 216 | 11.373 | 46.272 | 0.01389 | 640 | 18.666 | 322.248 | 408.585 | 424 | 49.903 | 0.595 |
| 5.00 | 220 | 9.194 | 59.504 | 0.00909 | 674 | 16.115 | 369.840 | 492.008 | 454 | 76.254 | 0.735 |
| r | 0.985 | 0.989 | 0.608 | 0.994 | 0.989 | 0.991 | 0.936 | 0.676 | 0.985 | 0.928 | 0.998 |
由清开灵作用下的金葡菌生长代谢图谱及参数分析可见，在一定范围内(0~5.00%)，随清开灵注射液剂量增加，金葡菌生长曲线整体呈“下降、后延”趋势;细菌指数生长期速率常数k1、最大热功率P1、稳定期最大热功率P2均相应减小;指数生长期达峰时间T1、稳定期达峰时间T2、稳定期与指数生长期达峰时间差△T、药物对细菌抑制率I均相应增大,且均与剂量呈较好的线性关系(r分别为:0.994、0.989、0.991、0.985、0.989、0.985和0.998);细菌传代时间tG也相应增加;而细菌第一指数生长期发热量Q1整体略呈下降趋势,稳定期发热量Q2、总发热量Q t整体略呈上升趋势，但相关性略差(r分别为0.608、0.936和0.676)。
5不同来源清开灵注射液样品热谱图初步分析
通过上述研究，选择和空白相比参数变化较大，但图谱不发生明显变形的浓度(1.67%)，对不同来源清开灵注射液样品的抑菌效果进行了测试,结果见图3。
图3中A1、A2和A3为BZY清开灵注射液生长曲线图,B1、B2和B3为SXTH清开灵注射液生长曲线图。由图可见，BZY、SXTH两个厂家的样品对于金葡菌生长曲线的影响有较大差异，BZY样品的稳定期较SXTH样品多一个峰，如图所示峰b，且P1也较SXTH样品大。
由图所示区域(稳定期)可见,BZY批次为811601的样品(A1)生长曲线明显区别于其他样品(峰a明显高于其他样品);SXTH的3批次样品生长曲线差异较小。
可见,不同厂家及同厂家不同批次的清开灵注射液，其质量差异可通过微量量热法初步表现出来。
讨论
本实验首次通过微量量热法较系统地研究了清开灵注射液对金葡菌代谢的影响，印证了文献报道的抑菌效应,并求得清开灵注射液对金葡菌的半数抑菌量(3.26%)和最佳抑菌量(5.47%)。结果显示，在特定条件下，一定剂量药物作用于细菌的生长曲线是相对稳定的，且与其活性相关，因此称之为“生物热活性特征图谱”(bio-activity fingerprint)。在相同条件下，清开灵注射液不同样品的生物热活性特征图谱存在不同程度的差异，在一定程度上反映了其质量的差异性。清开灵注射液作用于金葡菌的生物热活性特征图谱提示，微量量热法在研究清开灵注射液质量一致性方面可为评价清开灵注射液的质量提供思路。
微量量热检测技术具有普适性好、实时在线、客观灵敏、定性定量、经济高效等特点，符合中药药效与质量评价的客观现实和发展方向，有利于中药质量控制和药效评价等复杂性难题，在理论上比现行的中药指标性成分定性定量分析具有较明显的优越性。
本研究仅针对清开灵注射液的生物活性特征图谱的建立进行了初步探讨，生物活性特征图谱的差异与哪些成分变化直接/间接相关，在何种程度上影响药物内在质量，将进行深入探究。
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