?酵母菌生长周期及生长曲线测定操作步骤
酵母菌生长曲线测定操作步骤
（1）酵母菌活化。在无菌条件下，将1%酵母粉末加入灭菌后的5%葡萄糖溶液中。置于28℃摇床中振荡培养（转速200 r·min-1）活化3 h。
（2）酵母菌的YEPD液体培养。按1%比例将酵母菌液转移到新培养基中，置于28℃摇床振荡培养（转速200 r·min-1）5 h，将酵母培养至对数期，可冷藏保存。
（3）酵母菌的生长曲线。从摇晃均匀后的酵母菌YEPD液体培养基中无菌取出菌液，加入到灭菌过的新鲜YEPD液体培养基中，每间隔2 h测定吸光度数值，最终测得24 h的吸光度，用稀释后的混合液吸光度乘以相应的稀释倍数得吸光度数值。以接种后0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h、14 h、16 h、18 h、20 h、22 h和24 h为横坐标，以吸光度乘以相应稀释倍数为纵坐标，最终绘制出酵母细胞24 h的生长曲线。
结果
酵母菌的生长曲线
单细胞微生物的生长过程通常分为4个阶段，即适应期、对数期、稳定期和衰亡期。由图1知，酵母菌的生长曲线清晰地反映了酵母菌的4个生长阶段，初始阶段0～5 h为酵母菌生长的迟滞期；5～14 h的生长曲线呈大幅上升趋势，酵母菌经过短暂的适应期后快速生长，开始大量繁殖，发酵速度明显加快，菌种数量增多，说明酵母菌进入了生长对数期；14～22 h产生大量的次生代谢产物使得pH值下降，酵母菌生长环境恶劣，此时生长速度下降，酵母细胞的对数生长阶段结束进入稳定生长阶段，活菌数目变化不大，培养22 h后酵母菌的数量达到峰值。22 h以后，酵母菌的生长呈缓慢的下降趋势，是酵母菌生长的衰亡期。
图1酵母菌的生长曲线
综上可知，此高活性酵母的对数期在5～14 h。在酵母细胞稳定期，酵母细胞的生长速率和死亡速率达到基本平衡，此时酵母细胞的总体个数保持基本不变，所以不适合测定。而在对数生长期酵母的生长速率远远大于死亡速率，以最快速度进行繁殖，此时的酵母菌细胞活性旺盛，细胞个体形态及生理指标都较为稳定，所以本实验选取酵母为对数期酵母。