生活饮用水中微生物检测方法、菌落总数和肠球菌菌数定量分析（一）
【摘要】
目的 研制生活饮用水中菌落总数和肠球菌菌数定量分析标准样品。方法 将菌液与基质液充分混匀，分装，冷冻干燥，加塞压盖后制成标准样品。依据GB/T 15000.3-2023《标准样品工作导则 第3部分：标准样品定值和均匀性与稳定性评估》进行样品均匀性和稳定性检验与样品定值，以确保标准样品量值的溯源性和准确性。结果 菌落总数和肠球菌标准样品的均匀性数据在95%置信水平下，样品内和样品间F值分别为1.28和1.61，均小于F临界值(3.02)，均P > 0.05，差异无统计学意义，表明样品是均匀的；稳定性检验表明，菌落总数和肠球菌标准样品均可在25 ℃和36 ℃条件下稳定保存7 d，在42 ℃条件下稳定保存5 d，在-18 ℃条件下可稳定保存12个月；对6家参加定值实验室的数据统计分析得到样品中菌落总数标准值为3.370 lg CFU/mL，不确定度为0.074 lg CFU/mL (k=2)；肠球菌标准值为3.770 lg CFU/100 mL，不确定度为0.092 lg CFU/100 mL (k=2)。结论 研制样品中菌落总数和肠球菌的均匀性、稳定性、赋值等均符合有证标准样品的要求，能够满足预期用途。
饮用水与人们的生活和健康息息相关，随着人民对绿色健康生活追求的提升，饮用水的安全问题受到格外关注。饮用水中微生物含量超标将会对人体健康构成严重威胁。有研究报道，微生物污染是我国2002-2018年发生的水污染事件的主要诱因之一。被污染的生活饮用水中的菌落总数和肠球菌也是反映水环境中粪便污染的重要指标，主要用来评价水体被微生物污染的程度。
为了保障全国城乡居民的饮水安全，我国一直在不断完善针对生活饮用水的标准检验方法。1985年，我国颁布了《生活饮用水标准检验》(GB 5750-85)，2001年《生活饮用水检验规范》作为GB 5750-85的修订版发布，新增了对菌落总数的检测指标，但其理论及实验设计仍存在不完善的地方。2006年，《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2006)颁布，GB/T 5750-2006是参考当时国际的水质标准修订而成，对微生物的检测项目进行了更为严谨和详细的描述，并对检测方法作了进一步的完善，基本实现了与国际饮用水水质标准接轨。
随着社会经济的快速发展，我国实际的饮用水卫生情况有了新的变化，为了适应新的现代仪器分析技术水平和更全面地监控水环境的卫生状况，国家卫生健康委员会在2023年颁布了《生活饮用水标准检验方法》(GB/T 5750-2023)。GB/T 5750-2023新增了肠球菌的检测指标。然而，目前尚缺乏与之配套的实物标准。标准样品作为实物标准，是能确保技术标准应用效果在不同时间、空间的一致性的重要技术。均匀性、稳定性、准确性和溯源性是判定标准样品是否合格的重要指标，对这四大特性进行检验也是制备标准样品过程中不可缺少的程序。
冷冻干燥技术在保持产品的三维形状和完整性的同时，很好地延长了产品的保质期和存储时间。因此，冻干粉形态的标准样品具有容易保存、不易变质的特性，这使得它更加适合现场快速检测。目前，冻干粉形态的标准样品已逐渐成为食品快速检测过程中常见的标准样品类型。针对相关标准样品的迫切现实需求，本研究拟研制生活饮用水中菌落总数和肠球菌的冻干标准样品，以期为生活饮用水中微生物检测方法及相关检测活动提供必要的技术支撑。
1 材料与方法
1.1 实验菌株
金黄色葡萄球菌CMCC 26003，大肠埃希菌CMCC 44102，肠球菌ATCC 29212，肺炎克雷伯菌CMCC 46101，阴沟肠杆菌CMCC 45301，蜡样芽胞杆菌CMCC 63303，均来源于中国医学细菌菌种保藏管理中心(National Center for Medical Culture Collection, CMCC)和美国菌种保藏中心(American Type Culture Collection, ATCC)。
1.2 主要仪器与试剂
Pilot 5-10T真空冷冻干燥机(北京博医康仪器有限公司生产)，生物安全柜(苏州安泰空气技术有限公司生产)，低温恒温培养箱(日本PHC株式会社生产)，标准加热型磁力搅拌器(美国SCILOGEX公司生产)，MX-S多功能旋涡混合仪(美国SCILOGEX公司生产)，中硼硅玻璃管制注射剂瓶(浙江肖特药品包装有限公司生产)，注射制剂用氯化丁基橡胶塞(上海西氏医药包装有限公司生产)，全自动微生物鉴定及药敏分析系统(VITEK-2 Compact)(上海梅里埃生物制品有限公司生产)，基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry, MALDI-TOF)(德国布鲁克科技有限公司生产)，oCelloScope微生物生长曲线分析系统（丹麦Biosense公司生产），过滤真空隔膜泵(德国默克公司生产)，滤膜(孔径0.45 μm，德国默克公司生产)，高压蒸汽灭菌器(日本HIRAYAMA株式会社生产)，电子天平[赛多利斯科学仪器(北京)有限公司生产]，低温冷藏柜[松下冷链(大连)有限公司生产]。
相关新闻推荐
1、生活饮用水中微生物检测方法、菌落总数和肠球菌菌数定量分析（三）
2、多抗噬菌体菌株大肠杆菌E.coli PRE12在LB培养基和TB培养基下的生长曲线图